ПГТ-А методом NGS
Молекулярно-генетическое исследование доимплантационных эмбрионов на хромосомные нарушения (анеуплоидии) с целью увеличения вероятности положительного исхода вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ).
Хромосомные аномалии – одна из наиболее частых причин низкой результативности ВРТ. Поздний репродуктивный возраст родителей увеличивает количество, прежде всего, анеуплоидных эмбрионов. Последствиями переноса эмбриона с хромосомными нарушениями могут стать:
- Отсутствие имплантации эмбриона и развития беременности
- Ранние репродуктивные потери (замершая беременность, выкидыш)
- Различные пороки развития плода
- Рождение ребенка с хромосомным синдромом (синдромы: Дауна, Шерешевского-Тёрнера и другие).
В процессе ПГТ-А одномоментно исследуются все 23 пары хромосом: 22 пары аутосом и 1 пара половых хромосом. При этом получение генетической информации происходит путём «прямого считывания» нуклеотидной последовательности исследуемой ДНК. После обработки и интерпретации полученной информации мы имеем представление о хромосомном профиле каждого эмбриона на предмет наличия или отсутствия численных отклонений от нормы.
Метод NGS – это высокочувствительный метод в отношении хромосомных нарушений, который обеспечивает высокую точность результата - 99, 5% для всех не мозаичных эмбрионов. Это достигается за счет глубины «прочтения» (покрытия) исследуемых фрагментов ДНК (осуществляется несколько сотен тысяч прочтений на каждую хромосому).
Показания
- Две и более неудачные попытки ЭКО при переносе эмбрионов хорошего морфологического качества
- Возраст: у женщин -> 35 лет, у мужчин - > 40 (с возрастом супружеской пары риск хромосомных дефектов в гаметах значительно увеличивается)
- Наличие специфических изменений в кариотипах будущих родителей (требуется консультация генетика)
- Тяжелые нарушениями сперматогенеза у мужчины — олигоастенотератозооспермия, олигозооспермия, азооспермия
- Предыдущие беременности с хромосомной патологией
- Хроническое невынашивание беременности
Преаналитические требования к биоматериалу:
Биопроба
Подготовка эмбриональных биоптатов к исследованию осуществляется эмбриологами клиники по специально разработанным регламентам, предоставляемым нашей лабораторией клинике-партнеру. Биологический материал сопровождается бланком направления установленного образца.
Хранение и транспортировка
До отправки биологического материала допускается хранение его в морозильной камере при -20С. Транспортировка производится в специальном термоконтейнере с предварительно замороженными хладоэлементами.
Расходный материал
Термоконтейнер, микропробирки с буфером, штативы.
Поставка
Микропробирки с буфером и штативы, инструкция для эмбриолога о подготовке биоптатов, образец бланка направления предоставляются клиникам-партнерам исполнителем.
Этапы логистики
• Вывоз биологического материала из клиники в лабораторию осуществляется курьерской службой • Предварительная заявка клиники на исследование подается не менее, чем за сутки
Ограничения для проведения теста
• Контаминация биообразцов
• Отсутствие в микропробирке эмбрионального материала
• Недостаточное количество клеток в биоптате
• Частичная или полная деградация материала из-за нарушения температурного режима хранения и транспортировки, гибели клеток, лизиса внутриклеточных структур, неоднократного замораживания-оттаивания
Интерпретация и заключение
• Интерпретацию полученных в процессе исследования данных осуществляют лабораторные и клинические врачи-генетики • Выдаваемое заключение подписывается врачом-генетиком
Содержание и расшифровка заключения
• Указано количество поставленных образцов/количество проанализированных образцов • Описана кратко технологическая спецификация каждого этапа исследования • Дано заключение по хромосомному профилю каждого эмбриона: по всем 23 парам хромосом – указана плоидность, доверительный интервал, выделены патологические изменения • Предоставлено заключение относительно рекомендации к переносу эмбриона
Интерферирующие факторы
- Биологический фактор - эмбриональный мозаицизм. Частота мозаичных эмбрионов на стадии бластоцисты чаще всего составляет около 10%
- Технический фактор эмбриологического этапа – качество направленного в лабораторию эмбрионального материала. Биоптаты плохого качества расцениваются как неинформативные образцы
Общие рекомендации по результатам анализа
• Перенос мозаичных эмбрионов возможен и рассматривается в индивидуальном порядке • Решение о переносе эмбриона из числа протестированных принимается в клинике ЭКО на основании представленного лабораторией заключения и после очного медико-генетического консультирования пациента • Беременность после переноса мозаичного эмбриона требует особенного наблюдения и не исключает пренатального скрининга и пренатальной инвазивной диагностики по показаниям